在离轴数字全息显微和非相干光成像研究中，空间频域滤波是重建目标物体的振幅和相位信息的关键步骤。信号项频谱选取及中心定位对滤波后重建相位的质量有着极大影响，即使像素级的微小差异也会导致重建相位的严重失真。为了解决这个问题，文章提出了一种数字全息显微信号项频谱定位及干扰项抑制的方法。方法根据全息图频谱的直方图分布特性，自适应确定滤波形状和大小，同时，采用质心法来快速准确的确定信号项频谱的中心，并在频域中运用形态学处理来消除信号项频谱周围的干扰项。实现了信号项频谱自适应滤波，从而提高了相位重建的质量。文章使用二维山形图模拟相位进行了仿真验证，并搭建光路拍摄USAF1951标定板上的数字区域和洋葱表皮细胞进行了实验验证。仿真和实验结果表明，算法可以实现高质量的相位重建，并对干扰项进行抑制，提高了离轴数字全息显微系统的成像质量。